Качественное определение белка в моче. Кольцевая проба геллера Качественное определение белка в моче

Ге́ллера про́ба [по имени австрийского патолога И. Ф. Геллера (J. F. Heller)], реакция качественного определения белка в моче. Основана на свёртывании белка под действием кислот. На 1-2 мл 50%-ного раствора азотной кислоты осторожно наслаивают такое же количество профильтрованной мочи.

На границе двух сред образуется белое кольцо (положительная реакция), свидетельствующее о присутствии в моче белка. Кольцо может появиться и за счет нуклеоальбуминов или солей уратов; в первом случае оно исчезает при лёгком покачивании пробирки, во втором - кольцо располагается значительно выше границы сред и при нагревании мочи исчезает. Г. п.

позволяет обнаружить белок при его минимальной концентрации в моче (0,033%).

Первая проба

Первая проба Сегодня один тип мне сказал: «Зато вам будет что порассказать вашим внукам!» Болван какой! Как будто единственная мечта у меня - это под старость рассказывать внукам всякий вздор о том, как я висел на заборе. М. Булгаков «Записки на

ПРОБА СИЛ

ПРОБА СИЛ Пленный Девятаев ответил надменному фашисту:- Германия неминуемо будет побеждена!Летчик тогда не знал, что у него будет необыкновенное свидание с теми, кто работал вместе с фон Брауном над чудовищной машиной смерти.До Узедома было далеко.Широкий, неприятно

ПРОБА СИЛ

ПРОБА СИЛ Самое раннее упоминание о Меншикове относится к 1694 году: 29 августа царь отправил письмо архангельскому воеводе Федору Матвеевичу Апраксину; в перечне лиц, посылавших привет адресату, значился Алексашка Меншиков. «Алексашка» упомянут еще в одном письме,

Проба сил

Проба сил Третьего ноября 1992 года провели первую пробу сил. Точнее, русские для приличия вынуждены были сходить в патруль на гору. А вот двумя днями позже РДО пошел на крупную операцию в тылу противника у горы Будковы стены.Впятером, вооружившись до зубов, русские пошли на

Проба сил

Проба сил Петрович многому нас научил. Сам того не желая, он быстро выдвинулся по работе и стал общим консультантом. Я с его помощью разобрался лучше в коррегировании зубчатых колес, а также смог решать обратные задачи: устанавливать по зубьям сломанной шестерёнки

Глава 4. Эффект Геллера

Глава 4. Эффект Геллера Я прекрасно понимаю, что мое европейское турне не сопровождалось необходимым научным контролем, который мог бы подтвердить гипотезы ученых по поводу природы и происхождения энергетических сил, названных «эффект Геллера». И все же надеюсь, что эти

Проба сил

Проба сил Январь был на исходе, а зима не могла утвердиться в своих правах. Морозы сменялись оттепелями. Выпадал мокрый снег и тут же таял. Хмурое свинцовое небо нависало над лесом и селом Мосир, в котором мы задерживались четвертые сутки.Вершигора ходил в раздумье, все

«Проба на нюх»

«Проба на нюх» Если вы занимаетесь покупкой недвижимости, как я, то знаете, что всегда возникает искушение увлечься теоретическими вопросами и слишком много внимания уделить инженерной стороне дела. Вам присылают информацию о здании коммерческого назначения, и она вам

Феномен Геллера

Феномен Геллера В 70-х годах XX столетия со знаменитым экстрасенсом Ури Геллером были проведены научные эксперименты в Станфордском исследовательском институте, во время которых он гнул и ломал металлические предметы, стирал записи магнитофона, заставлял вещи исчезать и

Проба сил

Проба сил В августе 2008 года прогноз шефа Пентагона Роберта Гейтса о возможном вооруженном конфликте с Россией казался вполне реальным. Воспользовавшись уходом Путина с поста президента и Верховного главнокомандующего, в Вашингтоне решили проверить готовность Москвы

Проба

Проба Проба (Probe, essai) и пробирное дело – так называется определение лигатуры в драгоценных металлах, а также знаки, налагаемые особыми контрольными учреждениями на изделия из них, с назначением гарантировать для частных лиц определенное законом содержание благородных

ПРОБА СИЛ

ПРОБА СИЛ Когда вы начнете читать эту книгу, помните, пожалуйста, что тот, кто дал вам ее, сделал это потому, что думал о вашем благополучии и процветании, точно так же, как и мы.Уделите время изучению нашей системы и не торопитесь делать выводы, основываясь только на своем

Проба

Проба Начинать нужно на некотором тестовом варианте. Почему на тестовом? Потому что даже если вы собрали много информации, это не значит, что вы собрали всю необходимую информацию.Поэтому частой ошибкой является то, что люди сразу начинают делать что-то глобально.

Проба сил

Проба сил В первые послевоенные годы заметно расширились международные связи советских футболистов. Теперь уже значительно большее число наших клубов проводило товарищеские матчи с зарубежными командами, пусть еще не с самыми лучшими, но тем не менее в этих встречах мы

http://slovar.wikireading.ru/34558

Источник: http://vekoff.ru/bolezni-i-lechenie/meditsinskie-znaniya/33846-koltsevaya-proba-gellera

Качественное определение белка в моче

› Каталог статей › Клинические исследования › Исследование мочи

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

1. Пробирки химические, агглютинационные.
2. Набор градуированных пипеток.
3. Пипетки с узким оттянутым концом.
4. Спиртовки или газовая горелка.
5. Черная бумага.
6. Ледяная уксусная кислота.
7. Сульфосалициловая кислота.
8. Концентрированная азотная кислота.
9. Дистиллированная вода.

Методики определения белка в моче

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

1. кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
2. реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
3. реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
4. реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.2.

Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.3.

4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10-12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8-10 капель 10% раствора уксусной кислоты.

Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию.

Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о - promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2-3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3-4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем.

При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной.

Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают.

Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо.

Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется.

Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли – видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой).

Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой).

35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

1. Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
2. Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
3. Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
4. Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
5. Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
6. Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса – Стольникова – Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

1. Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
2. Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).

При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты.

В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды).

При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо.

Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды).

После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

Техника пользования таблицей для определения содержания белка в моче

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок - 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок – 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.

Занятие №3.

Тема: Определение белка в моче.

Цель: Изучить исследование химических свойств мочи.

Задачи:

Изучить количественные и качественные методы определения белка в моче;

Изучить основные принципы работы с тест-полосками на автоматических анализаторах.

Тип занятия: практическое (6ч)

Планируемые результаты:

Студент должен знать:

Качественные пробы для определения белка.

Метод Робертса – Стольникова.

Определение белка 3 % ССК.

Биуретовый метод определения белка (ТХУ).

Диагностическое значение исследования показателей.

Виды протеинурий.

Студент должен уметь:

Подготовить рабочее место к исследованию мочи.

Приготовить реактивы, посуду и оборудование к исследованию.

Определять химические свойства мочи (белок в моче качественными и количественными методами).

Работать с бланочной продукцией (оформление бланков анализа).

Правильно интерпретировать полученные результаты исследования.

Средства достижения поставленной цели:

1. Работа с конспектами, учебной и специальной литературой.

2. Подготовка к практическим занятиям с использованием методических рекомендаций преподавателя, выполнение и оформление практических работ.

3. Работа с информационными средствами обучения на электронных и бумажных носителях.

Оборудование учебного кабинета и рабочих мест кабинета:

посадочные места по количеству обучающихся;

рабочее место преподавателя;

специализированная мебель и оборудование.

Технические средства обучения:

компьютеры для оснащения рабочего места преподавателя и обучающихся;

технические устройства для аудиовизуального отображения информации;

аудиовизуальные средства обучения (презентация, учебный видеосюжет).

Результатом освоения урока является:

Формирование практических профессиональных умений и первоначального практического опыта, в том числе профессиональными (ПК ) и общими ( ОК ) компетенциями:

ПК 1.1 . Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.

ПК 1.2 . Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов.

ПК 1.3 . Регистрировать результаты проведенных исследований.

ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.

ОК 2 . Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 9 . Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

I модуль. Теоретическая часть с элементами самостоятельной работы

Задание №1. Изучите и законспектируйте учебный материал в рабочие тетради.

М оча здорового человека обычно содержит менее 0,002 г/л и редко до 0,012 г/л белка и как правило такое содержание белка в моче называют «в виде следов» и общепринятыми (унифицированными) химическими методами в моче здорового человека не определяется.

Содержание белка в порциях мочи, собранной в разное время суток, может колебаться в значительных пределах.

П оявление белка в моче называется протеинурия.

В зависимости от суточной потери белка различают следующие степени протеинурии: умеренная - до 1 г; средняя - от 1 до 3 г; выраженная - более 3 г.

Существует два основных вида протеинурии:

Протеинурии, обусловленные заболеваниями мочевыводящих путей;

протеинурии, при поражениях (заболеваниях) почек.

Протеинурии, связанные с воспалительными процессами мочевыводящих путей, сопровождаются появлением в моче значительного количества лейкоцитов или эритроцитов, что, однако, не позволяет исключить одновременного попадания белка в мочу из почечной паренхимы; содержание белка редко превышает 1 г/л.

Почечная протеинурия в большинстве случаев связана с повышенной проницаемостью гломерул и делится на 2 группы :

физиологическая протеинурия;

патологическая протеинурия.

К физиологической протеинурии относят случаи временного появления белка в моче, не связанные с заболеваниями:

после приема большого количества пищи, богатой не денатурированными белками (сырое мясо, сырые яйца);

при интенсивной мышечной работе (продолжительные походы, спортивные соревнования);

при приеме холодной ванны или душа;

при сильных эмоциональных переживаниях;

при эпилептических приступах.

Различают ортостатическую, или юношескую, протеинурию, встречающуюся у детей и подростков и проходящую с возрастом. В дифференциально - диагностическом отношении имеет практическое значение то, что ортостатическая альбуминурия обнаруживается нередко в период выздоровления после острого гломерулонефрита.

Патологическая почечная протеинурия может быть следствием органических заболеваний почек и других органов и систем: острые гломерулонефриты; хронические гломерулонефриты; острые пиелонефриты; хронические пиелонефриты; нефропатии беременных; различные заболевания, сопровождающиеся лихорадкой; выраженная хроническая сердечная недостаточность; а милоидоз почек; липоидный нефроз; туберкулез почки; геморрагические лихорадки; геморрагический васкулит; выраженная анемия; гипертоническая болезнь и др.

Задание №2. Перепишите и зарисуйте схемы лабораторных методов определения белка в моче.

Лабораторные методы определения белка в моче

Существуют качественные и количественные методы определения белка в моче, они основаны на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота); при этом измерение степени коагуляции делает пробу количественной.

Качественные методы

проба с 20% сульфосалициловой кислотой (унифицированная);

кольцевая проба Геллера (в настоящее время не используется);

обнаружение белка с помощью индикаторной бумаги (полосок) и тест-полосок.

Количественные методы

унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова;

с 3% сульфосалициловой кислотой.

Качественные методы определения белка в моче

Задание №3. Определение белка в моче с помощью у нифицированной пробы с 20% сульфосалициловой кислотой

Принцип метода: основан на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота)

20% сульфосалициловой кислоты (2-гидрокси-5-сульфобензойная кислота C 7 H 5 0 6 S ).

фильтровальная бумага

3мл профильтрованной мочи

2 шт. химические пробирки

Ход исследования:

В две пробирки вносят по 3 мл профильтрованной мочи, в одну из них (опытную) прибавляют 6-8 капель сульфосалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки.

Помутнение в опытной пробирке свидетельствует о наличии в моче белка - проба положительна.

Примечание. Мочу со щелочной реакцией перед исследованием подкисляют добавлением нескольких капель 10% раствора уксусной кислоты

Задание №4. Определение белка с помощью кольцевой пробы Геллера

Принцип метода: В основу положена кольцевая проба, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота – моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Посуда, оборудование и реактивы:

Химическая пробирка;

- реактивы: 30% раствор азотной кислоты ( HNO 3) ( d = 1,2) или реактив Ларионовой : 20- 30 г хлорида натрия (NaCl ) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO 3.

Ход исследования:

HNO 3

Интерпретация полученных результатов:

Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин тонкого белого кольца указывает на наличие белка в моче.

Количественное определение белка

Принцип метода: В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота - моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Посуда, оборудование и реактивы:

Химическая пробирка;

Реактив Ларионовой;

Фильтровальная бумага;

Биологическая жидкость (моча);

Дистиллированная вода.

Ход исследования:

В пробирку наливают 1 - 2 мл 30% раствора HNO 3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.

Интерпретация полученных результатов:

Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин
тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2-х мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления.

При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком - в 4 раза, при компактном - в 8 раз и т.д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.

Примечание:

Белое кольцо может образовываться при наличии большого количества уратов; в отличие от белкового оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании.

Задание №6. Определение количества белка в моче с 3 % сульфосалициловой кислотой

Принцип метода: Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой

Посуда, оборудование и реактивы:

3% раствор сульфосалициловой кислоты ( C 7 H 5 O 6 S ); j

0,9% раствор хлорида натрия;

1% стандартный раствор альбумина - 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия ( NaN 3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.

Ход исследования:

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора хлорид е натрия. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построение которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу) . Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Приготовление разведений для построения калибровочного графика

пробирки

Стандартный раствор, мл

0,9% раствор хлорида натрия, мл

Концентрация белка, г/л

0,05

9,95

0,05

0,1

9,9

0,1

0,2

9,8

0,2

0,5

9,5

0,5

1,0

9,0

1,0

Примечание:

Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгеноконтрастных соединений. Ложноположительные J реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Зарисуйте схему определения белка

Задание №7. Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса

Принцип метода: основан на реакции термопреципитации

Посуда, оборудование и реактивы:

Реактив: 2М ацетатный буфер рН 4,9.

Профильтрованная моча;

Водянная баня.

Ход исследования:

4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл буферного раствора и нагревают 15 мин на водяной бане при температуре 56°С.

Интерпретация полученных результатов:

При наличии в моче белка Бенс-Джонса уже в первые 2 мин появляется выраженный осадок.

Примечание:

При концентрации белка менее 3 г/л проба может быть отрицательна, что встречается довольно редко, так как обычно концентрация белка Бенс-Джонса в моче весьма значительна.

Наиболее достоверно выявление белка Бенс-Джонса осаждением при температуре 40-60°С. Однако в слишком кислой (рН менее 3,0) или слишком щелочной (рН более 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и низкой концентрации бежа Бенс-Джонса (менее 3 г/л) осаждение может не происходить.

Зарисуйте схему определения белка

II модуль. Самостоятельная работа с исследовательским этапом

Методические установки:

Задание №1. Изучите и законспектируйте приложение №1 «

Задание №2.

Получите образцы биологической жидкости (мочи) у преподавателя, пронумеруйте образцы;

Проведите исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;

Результат запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.

Приложение №1

« Обнаружение белка с помощью диагностических тест-полосок»

Принцип. Белок изменяет цвет индикатора, нанесенного на полоску. Индикаторы упакованы в комплекте по 100 полосок, которые хранятся в плотно закрытом пенале, прохладном и сухом месте.

Правила работы с диагностическими тест-полосками

При работе с диагностическими тест-полосками необходимо соблюдать следущие правила:

Держать диагностические тест-полоски в плотно закрытых упаковках-пеналах;

Хранить пеналы в темном, сухом, прохладном месте при температуре, не превышающей 30ºС, но не в холодильнике;

Не подвергать полоски действию влаги и прямого солнечного света, высокой температуры и летучих химических веществ;

Доставать только строго необходимое количество полосок, после чего немедленно закрывать пенал;

Не дотрагиваться пальцами до диагностических зон.

Правила проведения теста

1. Для исследования используйте утреннюю мочу, собранную в одноразовый пластиковый контейнер для мочи (или чистую сухую посуду). Перемешайте доставленную мочу, но не центрифугируйте.

В нимание!

При использовании нестандартной приспособленной тары остатки моющих средств в посуде для сбора мочи являются причиной ложных результатов.

2. Из пенала возьмите тест-полоску.

3. Сразу же закройте пенал фабричной крышкой, полоску охраняйте от влаги.

4. Индикаторные бумажные зоны полоски опустите на 2-3 секунды в исследуемую мочу и сразу же выньте.

5. Для удаления избытка влаги с диагностических зон полоски проведите ее длинным краем по краю контейнера (или иной емкости, в которой доставлена моча) или приложите этот край полоски к фильтровальной бумаге.

Смывать с диагностических зон полоски лишнюю мочу нельзя!!!

6. По истечении времени, указанного на этикетке пенала или в инструкции к каждому тесту, сравните цвет соответствующей диагностической зоны с цветной шкалой на этикетке пенала с полосками (эталоном). Порядок проведения теста представлен рисунками 1-7.

7. Реакцию оценивают как положительную или отрицательную. Или выражают в цифровом обозначении в г/л. (см. рисунок №8).

Рис. №8 Оценка результатов исследования

III Модуль. Контрольные вопросы и задания

Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь

Расскажите метод определения белка в моче 50% азотной кислотой.

Расскажите метод определения белка в моче 20 % ССК.

Расскажите методику определения белка в моче методом Робетса – Стольникова – Бранберга.

Расскажите методику определения белка в моче диагностическими тест- полосками.

Какие существуют правила работы с диагностическими тест-полосками.

Назовите основные критерии правильно проведенного теста.

Расскажите методику обнаружения в моче белка Бенс-Джонса.

Диагностическое значение определения химических свойств мочи.

Клиническая оценка химических свойств мочи.

Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение , используя изученный материал

Домашнее задание:

Знать теоретический и практический материал.

Отвечать на контрольные вопросы.

Знать термины.

Литература для самостоятельной подготовки: И.И.Миронова, Л.А.Романова, В.В.Долгов. Общеклинические исследования: моча, кал, ликвор, эякулят.- М.-Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2005

следует предварительно профильтровать.

Проба с сульфосалициловой кислотой. Наиболее чувствительной и распространенной является проба с 20% раствором сульфосалициловой кислоты.

Ход определения. Две химические пробирки помечают: «О» - опыт и «К» - контроль. В обе пробирки наливают 4-5 мл прозрачной мочи. В опытную пробирку добавляют 4-5 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты, хорошо перемешивают. Обе пробирки рассматривают рядом на черном фоне. При наличии белка в опытной пробирке отмечается помутнение. Контрольная пробирка служит для сравнения. Чувствительность пробы с сульфосалициловой кислотой 0,015 г/л.

Продукты расщепления белка - альбумозы - также дают положительную реакцию с сульфосалициловой кислотой. Для выяснения причины помутнения пробу нагревают. При этом помутнение, вызванное присутствием альбу-моз, исчезает, а помутнение, вызванное присутствием белка, усиливается.

Кольцевая проба Геллера. Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 1 - 1,5 мл 50% азотной кислоты или реактива Ларионовой. Затем наслаивают на

кислоту такое же количество мочи, так, чтобы жидкое не смешивались. При наличии белка на границе жидкосте] возникает белое кольцо. Реакцию оценивают на черном фоне и учитывают время появления нитевидного кольца Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.

Техника наслаивания. Мочу всегда наслаивают на кислоту, так как относительная плотность мочи ниже, чем кислоты. Наслаивание производят пастеровской пипеткой с баллоном, которой набирают небольшое количество мочи. Затем мочу вносят в узкую часть центрифужной пробирки, держа ее наклонно, наслаивают по каплям, медленно опуская мочу по стенкам пробирки.

Недостаток пробы заключается в появлении пигментного кольца от окисления урохрома азотной кислотой, Это коричневатое кольцо может мешать определению. В моче, содержащей ураты, иногда появляется беловатое кольцо выше границы жидкостей.

Более четкий результат пробы Геллера получается, если вместо 50% раствора азотной кислоты используют реактив Ларионовой (1% раствор азотной кислоты насыщенном растворе хлорида натрия).

Количественное определение

Количество белка в моче можно определить двумя способами: 1) методом Брандберга-Робертса - Столь-никова с разведением мочи; 2) по помутнению, образующемуся при добавлении 3% сульфосалициловой кислоты.

Метод Брандберга - Робертса - Стольникова. В основу этого метода положена кольцевая проба Геллера. Известно, что при содержании белка в моче в количестве 0,033 г/л образуется нитевидное кольцо на 2-3-й минуте Если белка в моче содержится больше, чем 0,033 г/л, то кольцо появляется раньше, причем не нитевидное широкое. Такую мочу следует развести дистиллированной водой и вновь уже с разведенной мочой проделать наслоение на азотную кислоту. Если после наслоенш появляется нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами, то разведение следует считать законченным. Количество белка в этом случае определяют, умножая 0,033 г/л нг степень разведения мочи. Разведение мочи подбирают пользуясь следующей ориентировочной оценкой свойст! кольца: если после наслаивания сразу появилось нитевидное кольцо, мочу разводят в 2 раза, если сразу появилос1 широкое кольцо-в 4 раза, если сразу появилось компак тное кольцо-в 8 или 10 раз.

Разведение мочи делают в мерной центрифужной робирке, наливая мочу до метки 1 мл и доливают водой до той метки, во сколько раз делается разведение. Содержимое пробирки тщательно перемешивают пастеровской пипеткой с баллоном.

Иногда приходится разводить мочу несколько раз. В этом случае при подсчете количества белка учитывают все разведения. Пример. При наслаивании цельной мочи появилось сразу компактное кольцо. Разводят мочу в мерной центрифужной пробирке в 10 раз (1 мл мочи и 9 мл воды до метки 10). Наслаивают разведенную в 10 раз мочу на азотную кислоту. Если сразу появляется широкое кольцо, то определение не закончено, его следует продолжить. Из первого разведения в 10 раз необходимо сделать еще разведение в 4 раза. Общая степень разведения в этом случае будет равна 40 (10x4). С разведенной в 40 раз мочой вновь ставят кольцевую пробу Геллера. При появлении нитевидного кольца между 2-й и 3-й минутами определение следует считать законченным.

При работе можно пользоваться поправкой Эрлиха- Альтгаузена, в случае, если нитевидное кольцо появляется ранее 2-й минуты. Чтобы не разводить мочу дополнительно, авторы предложили определить время появления нитевидного кольца и внести в расчет поправку на время. В этом случае количество белка рассчитывают умножая 0,033 г/л на степень разведения и на поправку. Значения поправок сведены в табл. 3.

Таблица 3. Значения поправок для определения белка

Время образования" Поправка кольца, мин Время образования Поправка кольца, мин

Ты - не раб!
Закрытый образовательный курс для детей элиты: "Истинное обустройство мира".
http://noslave.org

Материал из Википедии - свободной энциклопедии

Проба Геллера , по имени австр. патолога И. Ф. Геллера (J.F. Heller), распространенное название качественной реакции на белок в моче . Проба имеет чувствительность 0,033 г/л и используется в клинической диагностике протеинурии . Принцип выявления белка основан на его денатурации под воздействием денатурирующего фактора - концентрированной азотной кислоты или реактива Ларионовой .

Следует отметить, что в моче всегда присутствует некоторое количество белка, но, как правило, его концентрация в моче здорового человека ниже порога чувствительности качественной реакции и не выявляется простыми методами. Для количеств белка свыше 0,033 г/л проба непригодна. При более высоких концентрациях необходимо разбавлять мочу или использовать альбуминометр Эсбаха.

Для определения количества общего белка в моче используются метод, основанный на пробе Геллера - метод Брандберга-Робертса-Стольникова (W. Roberts, 1830-1899, англ. терапевт). Методика предполагает разведение мочи до нижнего предела чувствительности пробы (0,033 г/л) и времени образования кольца в 2-3 минуты.

Ход выполнения анализа

Реактивы: концентрированная (дымящаяся) азотная кислота или реактив Ларионовой. Исследуемая моча должна быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Приготовление реактива Ларионовой

Приготавливают насыщенный раствор хлорида натрия (20-30 г соли растворяют в 100 мл теплой воды, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают и фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты (можно заменить 2 мл соляной кислоты).

Техника исследования

В пробирку с 1-2 мл реактива осторожно по стенке наслаивают примерно такое же количество мочи. При наличии белка, примерно через 2-3 минуты, на границе раздела жидкостей наблюдается помутнение - белое кольцо из денатурировашего белка.

Ложноположительный результат может появиться при использовании азотной кислоты, за счет высокой концентрации нуклеоальбуминов или солей уратов. В первом случае оно исчезает при легком покачивании пробирки, а во втором кольцо располагается значительно выше границы раздела сред и исчезает при нагревании; при повторении пробы с разбавленной мочой кольцо не образуется. Иногда также появляется коричневатое пигментное кольцо от окисления урохрома азотной кислотой.

Использование реактива Ларионовой, в отличие от азотной кислоты, имеет ряд преимуществ: на границе наслоения не образуется пигментных колец, а положительный результат дает более четкие белковые кольца.

См. также

Напишите отзыв о статье "Проба Геллера"

Ссылки

Литература

[[К:Википедия:Статьи без изображений (страна: Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. )]][[К:Википедия:Статьи без изображений (страна: Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. )]]Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера

Отрывок, характеризующий Проба Геллера

Мне было до дикости больно и грустно за них, за себя, и за всех, кто боролся, всё ещё веря, что могут что-либо изменить... Да могли ли?.. Если все, кто боролся, лишь погибали, имела ли смысл такая война?..
Вдруг прямо передо мной возникла другая картина...
В той же маленькой каменной «келье», где на полу всё ещё лежало окровавленное тело Магдалины, вокруг неё, преклонив колени, стояли Рыцари её Храма... Все они были непривычно одеты в белое – снежно белые длинные одежды. Они стояли вокруг Магдалины, опустивши свои гордые головы, а по суровым, окаменевшим лицам ручьями бежали слёзы... Первым поднялся Волхв, другом которого когда-то был Иоанн. Он осторожно, будто боясь повредить, опустил свои пальцы в рану, и окровавленной рукой начертал на груди что-то, похожее на кровавый крест... Второй сделал то же самое. Так они поочерёдно поднимались, и благоговейно погружая руки в святую кровь, рисовали красные кресты на своих снежно-белых одеждах... Я чувствовала, как у меня начали вставать дыбом волосы. Это напоминало какое-то жуткое священнодействие, которого я пока ещё не могла понять...
– Зачем они это делают, Север?.. – тихо, будто боясь, что меня услышат, шёпотом спросила я.
– Это клятва, Изидора. Клятва вечной мести... Они поклялись кровью Магдалины – самой святой для них кровью – отомстить за её смерть. Именно с тех пор и носили Рыцари Храма белые плащи с красными крестами. Только почти никто из посторонних никогда не знал их истинного значения... И все почему-то очень быстро «позабыли», что рыцари Храма до гибели Магдалины одевались в простые тёмно-коричневые балахоны, не «украшенные» никакими крестами. Рыцари Храма, как и катары, ненавидели крест в том смысле, в котором «почитает» его христианская церковь. Они считали его подлым и злым орудием убийства, орудием смерти. И то, что они рисовали у себя на груди кровью Магдалины, имело совершенно другое значение. Просто церковь «перекроила» полностью значение Рыцарей Храма под свои нужды, как и всё остальное, касающееся Радомира и Магдалины....
Точно так же, уже после смерти, она во всеуслышание объявила погибшую Магдалину уличной женщиной...
– так же отрицала детей Христа и его женитьбу на Магдалине...
– так же уничтожила их обоих «во имя веры Христа», с которой они оба всю жизнь яростно боролись...
– так же уничтожила Катар, пользуясь именем Христа... именем человека, Вере и Знанию которого они учили...
– так же уничтожила и Тамплиеров (Рыцарей Храма), объявив их приспешниками дьявола, оболгав и облив грязью их деяния, и опошлив самого Магистра, являвшегося прямым потомком Радомира и Магдалины...
Избавившись от всех, кто хоть как-то мог указать на низость и подлость «святейших» дьяволов Рима, христианская церковь создала легенду, которую надёжно подтвердила «неоспоримыми доказательствами», коих никто никогда почему-то не проверял, и никому не приходило в голову хотя бы подумать о происходящем.